Quais são os meios de cultura dos microrganismos?

Os microrganismos, tais como outros organismos vivos, necessitam de obter os nutrientes necessários à sua sobrevivência. Dada a diversidade e multiplicidade das necessidades metabólicas, os diferentes meios de cultura preparados em laboratório devem poder satisfazer as exigências nutricionais dos vários microrganismos, auxiliando o estudo, análise e identificação dos mesmos.

Para além dos nutrientes, é também necessário proporcionar condições ambientais favoráveis ao seu desenvolvimento, tais como temperatura de incubação, pH, pressão osmótica, humidade e atmosfera (aeróbia, microaeróbia ou anaeróbia), entre outras.

Existe uma variedade enorme destes meios que, a par de outras utilizações em análises laboratoriais e estudos científicos como, por exemplo, na indústria de cosméticos, são principalmente utilizados na microbiologia alimentar e clínica.

Inicialmente, o meio deverá encontrar-se estéril para posterior inoculação e incubação em condições adequadas às necessidades da espécie que se está tentando isolar e identificar. Na preparação dos meios e na manutenção das culturas dos microrganismos é fulcral assegurar condições de assepsia, de modo a se evitarem contaminações.

O agar atua como um agente gelificante no meio de cultura, tornando-o essencial para o cultivo e pesquisa de muitos microrganismos. 

Os meios sólidos e semi-sólidos contêm 1 – 2 % e 0,075 - 0,5 % de agar, respetivamente. Os meios líquidos não contêm agar.

Nos meios sólidos, o crescimento pára por exaustão de nutrientes e, a fim de permitir um isolamento das diferentes colónias, dever-se-á proceder à sua repicagem para um novo meio. Os meios líquidos permitem uma melhor difusão de metabólitos mas não o isolamento das colónias.

Inicialmente, os meios de cultura chegam ao laboratório sob a forma de pó, sendo preparados com água destilada e aquecidos até que se dissolvam completamente. Após distribuição dos meios em frascos ou tubos, são esterilizados, na sua maioria por autoclavagem a 121ºC, durante 15 minutos.

Alguns meios são autoclavados a temperaturas diferentes, outros são filtrados e alguns meios não podem ser mesmo esterilizados, devido à sua composição química termolábil. Após a esterilização, os meios são armazenados em frigorífico e utilizados conforme necessário. Quando se torna necessária a sua utilização, são fundidos e distribuídos em placas de Petri, de forma a cobrir uniformemente o fundo da caixa (cerca de 15 a 20 ml). Após a solidificação são inoculados e em paralelo é efetuada uma prova de esterilidade, a fim de validar a sua utilização.

É necessário proceder ao controle de qualidade dos meios de cultura utilizados a fim de avaliar e verificar se estão em conformidade com os critérios definidos (ISO 11133:2014) de forma a validar e assegurar a fiabilidade dos resultados.

Para a avaliação do desempenho de um meio de cultura, há que ter em consideração os seguintes parâmetros:

1) Se é sólido, semisólido ou líquido;

2) Se é seletivo ou não seletivo;

3) Se é utilizado em métodos de quantificação ou pesquisa;

4) Parâmetros de avaliação a utilizar:

a) Produtividade: capacidade em recuperar a quantidade de microrganismos desejados;
b) Seletividade: capacidade de impedir o crescimento de microrganismos indesejados, permitindo o crescimento dos microrganismos pretendidos;
c) Especificidade: capacidade dos microrganismos crescerem no meio com as características esperadas (tamanho, cor, forma, entre outras).

5) Método a utilizar:

a) Quantitativo: baseado numa avaliação numérica da quantidade de microrganismos que o meio recupera;
b) Qualitativo: baseado apenas na observação de haver um crescimento ou não dos microrganismos, podendo este ser avaliado em crescimento nulo, fraco ou bom.

Os meios de cultura são a base de toda a microbiologia, pois sem eles não é, de todo, possível o estudo, identificação e análise dos microrganismos em laboratório.

Carla Patrícia Camacho
Direção Regional de Agricultura

Neste post vamos falar sobre os tipos de Meios de Cultura empregados na microbiologia clínica. Vamos detalhar as classificações e as principais funções dos meios mais utilizados. Você vai poder conhecer meios de cultura empregados no transporte, conservação, enriquecimento, meios seletivos, diferenciais etc., para cultura de bactérias e fungos.

Você pode assistir à aula em vídeo (abaixo), ou continuar lendo o texto.

O cultivo de microrganismos é fundamental para o conhecimento científico biológico geral. Através desses micros seres vivos é possível analisar a história do mundo, aprender sobre o comportamento do corpo humano, desenvolver cura para doenças e mais uma serie de possibilidades provindas do estudo científico.

A condição principal para o cultivo de microrganismo é fornecer um ambiente nutritivo isolado para que ocorra o crescimento desejado do microrganismo. Como estamos falando de princípio de análise, o isolamento é fundamental, visto que qualquer agente externo pode interferir no comportamento do microrganismo, interferindo nos resultados finais do estudo.

No caso de um tipo bactéria, pode ser requerido uma proteína, carbono, água e oxigênio para o cultivo de uma colônia. Se o objetivo for analisar um fungo ou até mesmo outro tipo de bactéria, a condição do ambiente vai variar. Em suma, a condição e o meio é alterada dependendo do tipo de microrganismo e objetivo almejado mediante o cultivo.

Porém, é válido ressaltar que por mais que o cultivo de microrganismos seja fundamental para a ciência e que os pesquisadores sempre estão evoluindo os seus métodos de trabalhos, a maioria desses micros seres vivos encontrados no ambiente não são cultiváveis em laboratórios, o que dificulta bastante o estudo dos mesmos.

Os tipos de meios de cultura para o cultivo de microrganismos

Os meios de cultura utilizados nos laboratórios são classificados como sólidos, semissólidos e líquidos. Os semissólidos se caracterizam por conter uma parte de sua composição feita de água e/ou de uma gelatina específica utilizada nos laboratórios; o líquido, por sua vez, é caracterizado por um caldo repleto de nutrientes para o desenvolvimento do microrganismo.

A classificação dos meios de cultura é feita em duas categorizas: sintético e complexo.

• Meio de cultura sintético:
  São classificados como meio de cultura sintético o ambiente nutritivo onde se sabe exatamente qual é a composição química. Esse método é muito comum em análises de laboratório, pois esse meio acaba suprindo as exigências nutritivas do organismo, permitindo o seu crescimento espontâneo.

• Meio de cultura complexo:
  Por sua vez, os meios de cultura complexo não possuem uma composição exata, sendo variados ou não definidos, como amido, tomate, malte, etc. Esse meio é comum quando não existe uma necessidade nutritiva específica exigida pelo microrganismo. A cultura complexa é muito comum em fungos e bactérias heterotróficas.

A classificação dos meios de cultura

Os meios de cultura mais utilizados podem ser classificados pelas seguintes condições:

• Meios enriquecidos: Para alguns microrganismos o seu cultivo será muito complicado, portanto, é necessário fornecer um ambiente enriquecido de nutrientes para que ele possa se manter e crescer, possibilitando a sua análise;
• Meios diferenciais: Esse meio é utilizado para estabelecer diferenças em microrganismos semelhantes;
• Meios seletivos: Os meios seletivos permitem a ação de uma substância que para o crescimento de um microrganismo permitindo o crescimento de outro. O objetivo, como o próprio nome indica, é fazer uma seleção a fim de realizar uma análise mais complexa;
• Outros meios: Pré-enriquecido, seletivo e diferencial, triagem, identificação, dosagem, contagem e estocagem.

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